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乙肝動(dòng)物模型構(gòu)建
更新時(shí)間：2025-06-24
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廠商性質(zhì)：其他
一、乙肝動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇
1. 常用動(dòng)物模型及特點(diǎn)
| 模型類型 | 動(dòng)物 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) | 適用研究 |
|---|---|---|---|---|
| 自然感染模型 | 黑猩猩（Chimpanzee） | 最接jin人類HBV感染 | 倫理限制、成本ji高 | 基礎(chǔ)研究（已基本棄用） |
| 人源化肝臟小鼠 | FRG/FRGN、uPA/SCID、TK-NOG | 支持HBV感染和復(fù)制 | 免疫缺陷、需人肝細(xì)胞移植 | 藥物評(píng)價(jià)、病毒生命周期 |
| HBV轉(zhuǎn)基因小鼠 | HBV-Tg（如1.3HBV-Tg） | 穩(wěn)定表達(dá)HBV抗原 | 不模擬自然感染過程 | 免疫耐受機(jī)制研究 |
| AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)模型 | C57BL/6、BALB/c | 快速建立HBV持續(xù)感染 | 非自然感染方式 | 免疫清除機(jī)制研究 |
| 鴨/土撥鼠HBV模型 | 鴨（DHBV）、土撥鼠（WHV） | 可模擬部分HBV特征 | 與人HBV存在差異 | 抗病du藥物篩選 |
2. 選擇依據(jù)
研究病毒復(fù)制 → 人源化小鼠 或 AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)模型
研究免疫應(yīng)答 → HBV-Tg小鼠 或 AAV-HBV模型
藥物開發(fā) → 鴨/土撥鼠模型（初篩）→ 人源化小鼠（驗(yàn)證）
二、乙肝動(dòng)物模型構(gòu)建模型構(gòu)建方法
1. 人源化肝臟小鼠模型（接jin人類HBV感染）
步驟：
選擇免疫缺陷小鼠（如FRG小鼠：Fah?/? Rag2?/? Il2rg?/?）。
移植人肝細(xì)胞（原代人肝細(xì)胞或HepaRG細(xì)胞系）。
HBV感染（靜脈注射臨床HBV分離株，如基因型A-D）。
監(jiān)測指標(biāo)：
血清HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA載量（qPCR）
人肝細(xì)胞嵌合率（人Albumin檢測）
優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：支持完整HBV生命周期（cccDNA形成、病毒分泌）。
缺點(diǎn)：成本高、需專業(yè)移植技術(shù)。
2. AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)模型（快速建立持續(xù)感染）
步驟：
選擇AAV血清型（如AAV8，靶向肝臟）。
構(gòu)建AAV-HBV載體（含1.3倍HBV基因組，如pAAV-HBV1.3）。
尾靜脈注射（劑量：1011–1012 vg/只）。
監(jiān)測指標(biāo)：
血清HBsAg（持續(xù)6個(gè)月以上）
肝內(nèi)HBV DNA/RNA（qPCR）
優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：操作簡單、成本低。
缺點(diǎn)：非自然感染，無cccDNA形成。
3. HBV轉(zhuǎn)基因小鼠（研究免疫耐受）
常用品系：
1.3HBV-Tg：完整HBV基因組，高表達(dá)HBsAg。
HBV-S-Tg：僅表達(dá)HBsAg（模擬慢性攜帶狀態(tài)）。
應(yīng)用：
研究HBV免疫逃逸機(jī)制。
評(píng)估治療性疫苗（如打破免疫耐受）。
4. 鴨/土撥鼠HBV模型（替代模型）
鴨乙肝模型（DHBV）：
感染方式：靜脈注射DHBV（10?–10?病毒顆粒）。
監(jiān)測指標(biāo)：血清DHBsAg、肝內(nèi)DHBV DNA。
土撥鼠肝炎模型（WHV）：
應(yīng)用：評(píng)估抗病du藥物（如恩替ka韋）。
三、關(guān)鍵檢測指標(biāo)
1. 病毒學(xué)指標(biāo)
血清標(biāo)志物：
HBsAg、HBeAg（ELISA）
HBV DNA（qPCR，檢測下限<10 IU/mL）
肝內(nèi)HBV標(biāo)志物：
cccDNA（Southern blot或特異性qPCR）
HBcAg（免疫組化）
2. 免疫學(xué)指標(biāo)
T細(xì)胞應(yīng)答：
HBV特異性CD8? T細(xì)胞（流式檢測MHC多聚體）
IFN-γ ELISPOT（肽段刺激）
體液免疫：
抗-HBs抗體（評(píng)價(jià)疫苗效果）
3. 病理學(xué)分析
肝組織HE染色：炎癥、纖維化。
天狼星紅染色：肝纖維化程度。
四、注意事項(xiàng)
1. 生物安全
HBV操作需在 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
人源化小鼠排泄物可能含HBV，需嚴(yán)格管理。
2. 模型局限性
人源化小鼠：缺乏完整免疫系統(tǒng)，難模擬免疫清除期。
AAV-HBV模型：無cccDNA，不能評(píng)估靶向cccDNA的藥物。
3. 對(duì)照設(shè)置
陰性對(duì)照：空載體注射或野生型小鼠。
陽性對(duì)照：已知抗病du藥物（如替nuo福韋）。
五、應(yīng)用示例
藥物評(píng)價(jià)：人源化小鼠中測試 GS-9620（TLR7激動(dòng)劑） 對(duì)HBV的抑制作用。
免疫機(jī)制：AAV-HBV模型研究 PD-1抗體 對(duì)T細(xì)胞功能的恢復(fù)作用。
疫苗開發(fā)：HBV-Tg小鼠評(píng)估 治療性疫苗（如HBsAg-抗體復(fù)合物疫苗）。
