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銀染實(shí)驗(yàn)

銀染實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述:
銀染實(shí)驗(yàn):銀染法是一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù),其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)。

更新時(shí)間:2024-09-27

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廠商性質(zhì):其他

銀染實(shí)驗(yàn)


一、定義與原理

  • ?定義?:銀染是一種通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使銀離子在蛋白質(zhì)上沉積形成可見(jiàn)的銀顆粒,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行染色的技術(shù)。

  • ?原理?:在堿性條件下,甲醛等還原劑可以將蛋白帶上的xiaosuanyin(銀離子)還原成金屬銀,這些金屬銀顆粒沉積在蛋白質(zhì)上,形成可見(jiàn)的染色效果。

二、試劑與材料

銀染過(guò)程中常用的試劑包括:

  • 乙醇

  • 冰醋酸(純乙酸)

  • xiaosuanyin

  • jiaquanrongye

  • 碳酸鈉

  • liudailiusuanna

  • 乙酸鈉等

這些試劑在銀染的不同步驟中發(fā)揮著不同的作用,如固定、致敏、染色、顯色和終止等。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

銀染實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)階段:

1.   ?固定?:使用含有乙醇和冰醋酸的固定液處理凝膠,以穩(wěn)定蛋白質(zhì)并去除凝膠中的雜質(zhì)。

2.   ?致敏?:通過(guò)加入乙酸鈉和liudailiusuanna等試劑,使凝膠表面變得更容易吸附銀離子。

3.   ?洗滌?:使用純水洗滌凝膠,去除多余的試劑。

4.   ?染色?:將凝膠浸泡在含有xiaosuanyin和甲醛的染色液中,使銀離子與蛋白質(zhì)結(jié)合。

5.   ?顯色?:在堿性條件下,使用含有碳酸鈉和甲醛的顯色液使銀離子還原成金屬銀,形成可見(jiàn)的染色效果。

6.   ?終止?:使用終止液(如EDTA或ganansuan)停止顯色反應(yīng),并固定染色結(jié)果。

銀染法實(shí)驗(yàn)具體步驟如下:

1. 固定:將凝膠放入約100ml固定液中,室溫?fù)u動(dòng)20分鐘或40分鐘以上甚至過(guò)夜。

2. 洗滌:棄去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

3. 增敏:加入100ml銀染增敏液(1X)或100ml銀溶液(1X),室溫?fù)u動(dòng)2分鐘。

4. 洗滌:棄去增敏液,加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

5. 顯色:加入100ml銀溶液(1X)或顯色液,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。

6. 洗滌:棄去顯色液,加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水,室溫?fù)u動(dòng)1-1.5分鐘。

7. 顯影:根據(jù)顯色結(jié)果,使用顯影液進(jìn)行顯影,直至看到目的蛋白帶






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