發(fā)布時(shí)間: 2025-07-09 點(diǎn)擊次數(shù): 4次
一、 解剖新生大鼠的脊髓組織
1. 用溫?zé)岬纳睇}水擦拭P2天的新生鼠;
2. 用70%乙醇沖洗P2新生鼠;
3. 分離脊髓,放入裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中;
4. 剝離脊膜,轉(zhuǎn)移脊髓到裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中。
二、 制備混合膠質(zhì)細(xì)胞群
1. 清洗所有P2新生鼠的脊髓組織;
2. 把脊髓剪成小塊;
3. 加入新鮮的DMEMwan全培養(yǎng)基4-5ml,吹打10-15次;
4. 用100um的濾器過濾;
5. 離心2500RCF/5min/4℃。
三、 種植混合膠質(zhì)細(xì)胞群
1. 4個(gè)P2新生鼠脊髓組織混合細(xì)胞群種到一個(gè)T-75培養(yǎng)瓶中;
2. 第5天全量換液,之后每3天全量換液。
四、 原代小膠質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
1. 2-3周,當(dāng)混合的細(xì)胞群長(zhǎng)滿T-75培養(yǎng)瓶底;
2. 在37℃以150rps的速度搖動(dòng)T-75培養(yǎng)瓶2小時(shí);
3. 用移液管從所有T-75培養(yǎng)瓶中收集培養(yǎng)基,不要破壞培養(yǎng)瓶表面的星形膠質(zhì)細(xì)胞層;
4. 離心2500RCF/5min/4℃;
5. 吸取上清液,將沉淀重懸于1 ml小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中;
6. 計(jì)數(shù);
7. 種植小膠質(zhì)細(xì)胞。
五、 代表性結(jié)果
