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    人外周血PBMC的CD4+ T細胞磁珠分選及流式鑒定

    發(fā)布時間: 2025-05-28  點擊次數(shù): 148次

    一、 人外周血單個核細胞(PBMC)的分離

    1. 3ml抗凝血加入3ml 1×PBS進行稀釋。

    2. 在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細胞分離液,再在液面上方平鋪3ml稀釋過的抗凝血,常溫下,水平離心機600g,離心30min。

    3. 吸取中間白膜層細胞,加入15ml離心管中,再加入10ml 1×PBS混勻,常溫下,1000rpm,離心10min,棄上清,每管加入2ml MACS緩沖液重懸細胞并計數(shù),調(diào)整細胞數(shù)量,每個樣本不超過107個細胞。

    4. 2000rpm,離心3min,棄上清。


    二、 磁珠分選

    1. 每管加入40ul MACS緩沖液重懸細胞,再加入10ul CD4+T Cell Biotin-Antibody Cocktail, human,混勻,4℃孵育5min。

    2. 每管加入30ul MACS緩沖液,再加入20ul CD4+T Cell MicroBead Cocktail,human,混勻,4℃孵育10min。

    3. 將分選柱置于磁力架上,加入3ml MACS緩沖液潤洗柱子,待液體不再流出,更換新的離心管。

    4. 將細胞懸液加入分選柱,待液體不再流出,加入3ml MACS緩沖液洗柱子,液體收集完畢,將離心管撤離后,再將分選柱撤下。

    5. 將收集到的細胞懸液進行離心,1500rpm,5min,去上清。


    三、流式鑒定


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